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分享一些成功運(yùn)用NEB R3142S--NEB/KpnI-HF試劑盒進(jìn)行科研項目的案例

更新時間:2025-05-07      點(diǎn)擊次數(shù):54
以下是一些成功運(yùn)用 NEB R3142S - NEB/KpnI - HF 試劑盒進(jìn)行科研項目的案例:


  • 構(gòu)建植物表達(dá)載體1:在 “一種植物葉片高表達(dá)雙向啟動子及其應(yīng)用" 的研究中,科研人員取 10μg 人工直接合成的 promoter at1g52220/30 片段與 1μg 的 pcambia1300 - egfp - mcherry 空載體質(zhì)粒,分別用 BamHI(NEB,#R3136S)及 KpnI(NEB,#R3142S)雙酶切,37℃酶切 3 小時。割膠回收酶切反應(yīng)產(chǎn)物,用 T4 DNA 連接酶連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH5α 感受態(tài)細(xì)胞,最終獲得了 pcambia1300 - egfp - mcherry - promoter at1g52220/30 載體,用于后續(xù)在煙草葉片中的瞬時表達(dá)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了雙向啟動子的有效性。

  • 構(gòu)建融合蛋白表達(dá)載體3:在 “一種 DNA 環(huán)化分子及其用途的制作方法" 的研究中,以 LDB1 的 cDNA 作為 PCR 模板,設(shè)計帶有 KpnI - HF 酶切位點(diǎn)的引物,擴(kuò)增 LDB1 的 dimmer domain(DD)片段。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后,與 pST1374 - N - NLS - Flag - Linker - dCas9 載體用 NotI - HF(NEB,R3189S)和 KpnI - HF(NEB,R3142S)做酶切,37℃孵育 2h。酶切產(chǎn)物經(jīng)割膠回收后,通過 T4 連接酶連接,轉(zhuǎn)化涂板,經(jīng) Sanger 測序得到正確的 DD - dCas9 質(zhì)粒,用于后續(xù)研究融合蛋白 LDB1 - dCas9 對基因表達(dá)的調(diào)控作用。



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